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POLYSCIENCES上海鼎桑代理

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美國POLYSCIENCES公司成立于1961年，主要生產和經營LIFE SCIENCES生命科學（膠體金,不含甲醛的甲醇等），病理學和顯鏡學 微球和粒子和磁珠各種單體和聚體等產品。polysciences公司是世界上zui大zui全的23966上海鼎桑代理 多聚化合物供應商,同時是世界*的免(mian)疫學,組織化學試劑耗材供應商.

上海鼎桑polysciences 23966大(da)量現(xian)貨供應

轉染試劑線性PEI溶液的配制（1mg/ml）

聚乙烯亞胺（Polyethylenimine，PEI）是聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子，每相隔二個碳個原子，即每“第三個原子都是質子化的氨基氮原子，使得聚合物網絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿”(proton sponge)體。PEI，可用作轉染試劑，它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉染真核細胞。有實驗證明，分子量為25000的線性PEI即Polysciences 23966轉染效率zui高。

下面將主要介紹polysciences 線性PEI(#23966)的產品特性及其溶液的配制過程。

1. 產品(pin)特(te)性:

產品名稱：線性聚乙烯亞胺(PEI)

2. 溶液配制

此指導說明書是經polysciences公司研究，測試及其客戶反饋的后編寫的。下面推薦一種簡單適用而的方法，講述如何配制濃度為1mg/mL的轉染試劑的配制。

材料：

1g #23966、1L 純(chun)水(shui)（Milli-Q®純(chun)水(shui)，注射用(yong)水(shui)（WFI），或類似的生(sheng)物級水(shui)）、12 M鹽酸、10 M氫氧(yang)化鈉、一次(ci)性0.1-0.2µm PES真空無菌(jun)過濾器、無菌(jun)高聚乙烯或聚丙烯試劑瓶(ping)。

器材：

1 L 玻(bo)璃燒杯(bei)、1 L玻(bo)璃量筒、核準pH計、2支1 mL塑(su)料移液管、托盤、聚四氟乙(yi)烯（PTFE）攪拌棒(bang)、真空(kong)泵

配制過程：

1g #23966——900mL水(shui)溶(rong)解——攪(jiao)拌(ban)、加(jia)熱（60-80°C）——加(jia)HCl調pH到2.0左右——蓋上燒杯，攪(jiao)拌(ban)3h（直至粉末*溶(rong)解）——冷卻(que)至室溫(wen)——加(jia)NaOH調pH到6.9-7.1——移液到量筒(tong)，加(jia)水(shui)補(bu)足至1L——真空過濾消(xiao)毒——分裝，-20°C保存。

備注：加熱或加酸都有助于PEI溶解。當然酸可能不用加那么多，詳細用量可試加一點攪拌看看，足夠溶解就行，不一定需要加到pH那么低。

試劑儲存：

冷凍部分溶液可在-20°C保存長達一年；部分解凍的溶液可在4°C保存2周，不可反復凍融。

粉末儲存：

未開封的粉末有效期兩年。可在室溫下保存直至使用。

轉染操作流程：(瞬時轉染方法) 轉染效率（部分數據參考，本數據來源于網絡，不作為售后投訴依據）

1. 接種細胞(bao)： 轉(zhuan)染前一天，用膠原酶（WORTHINGTONG 公司 LS004196)消化細

胞并計數（不建議用胰酶）。調整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養的器皿，每個孔置

入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到 70~80%。

2. 準備 DNA-PEI 復(fu)合物(wu)： DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前(qian)需先使其(qi)

升至室溫。，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養基稀釋適

量 DNA。用同樣的培養基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性 PEI 轉

染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液 的試管，一邊將稀釋的線性 PEI 轉染試劑滴

加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以

形成 DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14

mL 離(li)心管。

3. 轉染細胞： 直接向每個(ge)孔中加入 DNA-PEI 復(fu)合物并輕(qing)輕(qing)渦(wo)旋培養(yang)板/培養(yang)皿。在

無血清條件下轉染時，去除生長培養基，替換成無血清培養基，然后滴 DNA-PEI 復

合物。轉染 3 h 后，添加½體積的包含 30%血清的生長培養基。

4. 孵(fu)(fu)育細(xi)胞(bao)(bao)和分(fen)析(xi)結果： 在 CO2 培養箱(xiang)中 37℃下孵(fu)(fu)育細(xi)胞(bao)(bao)至可以分(fen)析(xi)檢測。轉

染后快 的話7 h 即可檢測到轉入基因的表達。 請自行確定適合檢測時間。

細胞種類 中文名稱 PEI 轉染效率

HEK293 人胚腎細胞(bao) 90%-95%

293-T 人胚(pei)腎(shen)細胞 90%-95%

CHO-K1 倉(cang)鼠卵巢(chao)細胞 80%-90%

U251 人源神(shen)經膠質(zhi)瘤細胞 80%-90%

Hela 人(ren)源(yuan)宮頸ai細(xi)胞(bao) 70%-80%

COS7 猴 SV40 轉(zhuan)化腎細胞(bao) 70%-80%

HepG2 人源肝癌細胞 70%-80%

NIH/3T3 小(xiao)鼠胚(pei)胎成纖維細胞 60%-70%

膠質瘤干細胞 人源膠質瘤干細胞 60%-70%

Patu8988 人(ren)源胰腺癌細胞 60%-70%

U2OS 人源骨肉瘤細胞 60%-70%

轉染試劑和 DNA 配比數據

細胞型號 培養基 每孔細胞數 DNA 的量 轉染試劑量 和培養基混合 4-6h

293H DMEM 3×10

4

0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS

293FT DMEM 3×10

4

0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS

293E DMEM 3×10

4

0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS

293F DMEM 3×10

4

0.2µg 0.5µL DMEM+10%FBS

COS7 DMEM 1.5×10

4

0.4µg 0.5µL DMEM+10%FBS

hela DMEM 2×10

4

0.3µg 0.5µL 1640+15%FBS

Caco2 MEM 3.5×10

4

0.3µg 0.75µL MEM+10%FBS

BHK21 MEM 2×10

4

0.2µg 0.5µL MEM+10%FBS

CHO-DG44 DMEM+HT+pro 2×10

4

0.5µg 0.5µL DMEM+HT+pro +10%FBS

RAW264.7 DMEM 3×10

4

0.2µg 0.5µL DMEM +10%FBS

MCF7

MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium

pyruvat

2×10

4

0.1µg 0.25µL

MEM/NEAA+0.01mg/mL insulin + sodium

pyruvat+10%FBS

SW480 IMDM 3×10

4

0.4µg 0.5µL IMDM +10%FBS

MDCK DMEM 4×10

4

0.6µg 1µL DMEM+10%FBS

CHO-K1 IMDM+Pro 3×10

4

0.2µg 0.5µL IMDM+Pro +10%FBS

HepG2 DMEM 3×10

4

0.5µg 0.75µL DMEM+10%FBS

A549 DMEM 2×10

4

0.3µg 0.5µL DMEM+10%FBS

NIH/3T3 DMEM 1.5×10

4

0.1µg 0.75µL DMEM+10%FBS

vero DMEM 3×10

4

0.3µg 0.75µL DMEM+10%FBS

sf9 SIM SF 5×10

4

0.4µg 0.75µL SIM SF+10%FBS